NgAgo的优势
最大的优势在于只有5'磷酸化的DNA(5'-p-ssDNA，哺乳动物体内稀少)才可以介导NgAgo的剪切，且二者的接触时间也会影响剪切效果。如果先转入NgAgo，24 h后再转入5'-p-ssDNA，NgAgo-ssDNA结合明显减少(图7)。
图7 NgAgo和5'-p-ssDNA接触时间影响剪切效果
但NgAgo和5'-p-ssDNA结合具有高度特异性，只有从共转了NgAgo和相应5'-p-ssDNA的才可以对靶标进行剪切，且二者一旦结合，NgAgo便不会兼顾其他DNA，并且只特异性针对目的位点进行切割，从而减少了“脱靶”效应，优于CRISPR-Cas9(图8)。这是文章的立论依据和关键所在，如果这点不成立，那后边的研究都是没用的。
图8 NgAgo和5'-p-ssDNA特异性结合，减少“脱靶”效应
该系统最厉害之处在于，NgAgo的容错率很低，错配一个碱基就会减少NgAgo73%-100%的效率，三个碱基错配时，NgAgo作用基本消失，有效避免了“脱靶”(图9)。而CRISPR-Cas9最高可容忍5个碱基错配，大大降低了修饰效率。
图9 NgAgo容错率很低，三个碱基错配时，NgAgo作用基本消失
对于切割事件的启动，韩春雨在报告里称NgAgo仅受GC丰度限制，而CRISPR-Cas9受PAM区和富含GC序列的限制。
NgAgo在人293T、MCF7、K562和Hela细胞里也取得不错的基因编辑结果(图10)。
图10 NgAgo在人293T、MCF7、K562和Hela细胞中的效果
此外，在插入目的DNA片段方面，NgAgo不仅可以准确插入目的基因(图11b)，而且可进行NHEJ(非同源性末端连接)(图11c)，且效率不错(图11d)。
图11
NgAgo技术亟待解决的问题
NgAgo目前仅处于研究阶段，尽管科学家们已将Agos应用到了不同物种，如线虫、斑马鱼、拟南芥、酵母等各种模式生物中，但对于NgAgo，正如韩春雨所述，仍有几项需要优先验证的问题：系统正交性、多位点编辑能力、NgAgo蛋白模块化程度(即工程化改造的潜力)以及ssDNA的通用性和缺点。而ssDNA很有可能是NgAgo-gDNA面临的技术瓶颈，因为人类细胞中5'-p-ssDNA并不丰富。
